Vaasa, laboratorio-ohjekirjaVaasa, laboratorio-ohjekirjaSe även / Ks. myös: Ohjekirjan etusivu | Aakkosellinen luettelo | Aiheenmukainen lista | Päivitykset |Tiedotteet
15.10.2018
TYKS Laboratoriotoimialue / Molekyylihematologia.
T-solureseptorit tunnistavat vieraita antigeenejä, jotka ovat sitoutuneet histokompatibiliteetti-molekyyleihin (MHC) antigeeniä esittelevien solujen (APC) pinnalle. T-solureseptori on dimeeri-molekyyli, joka koostuu joko yhdestä alfa- ja yhdestä beta-ketjusta tai yhdestä delta- ja yhdestä gamma-ketjusta. Kypsyvässä T-solussa T-solureseptorit uudelleenjärjestyvät hierarkkisesti järjestyksessä delta → gamma → beta → alfa. Jos sekä delta- että gamma-uudelleenjärjestymät tuottavat fuktionaaliset delta- ja gamma-ketjut, solu eksressoi näitä. Jollei, solu etenee uudelleenjärjestämään beta- ja alfa-lokukset. TCR-delta-geenilokus (TCRD) sijaitsee alfa-geenilokuksen sisällä kromosomissa 14q11.
TCRD-lokus sisältää 8 V-geeniä, 3 D-geeniä ja 4 J-geeniä. TCRD-lokuksen geenirepertuaari on suppeampi kuin esim. IgH-lokuksessa, mutta monimuotoisuutta lisää mm. mahdollisuus usean eri D-geenin läsnäoloon syntyvässä uudelleenjärjestymässä. Delta-geeni uudelleenjärjestyy rekombinaatiomekanismien avulla samaan tapaan kuin IgH-lokus. Ensin yhtyvät D- ja J-geenit, ja myöhemmin V-geeni liittyy DJ-kompleksiin. Konstanttigeeni (C) yhdistyy kompleksiin myöhemmin transkription ja pujonnan kautta vaikuttavien mekanismien avulla.
Koska kukin T-solu uudelleenjärjestää TCR-geeninsä uniikkiin tapaan, voidaan terveen henkilön näytteessä tavallisesti havaita vain polyklonaalinen uudelleenjärjestymien kirjo. Klonaalisessa T-lymfoproliferatiivisessa taudissa pahanlaatuinen klooni voi käsittää valtaosan lymfaattisista soluista, ja tällöin myös klonaalisen solun sisältämä TCR-uudelleenjärjestymä voidaan havaita molekyyligeneettisin keinoin. TCR-geenien uudelleenjärjestyminen ei ole täysin spesifinen T-lymfoproliferatiivisille taudeille, koska sitä tavataan toisinaan myös B-lymfoproliferatiivisissa taudissa (ristilinjaisuus). Tunnetaan myös tiloja, joissa klonaalisuuteen ei välttämättä liity pahanlaatuista kasvua ja klonaalinen T-lymfosytoosi voi pysyä stabiilina (TCUS eli T-Cell Clonopathy of Undetermined Significance).
Tässä tutkimuksessa käytetään kvalitatiivista PCR-teknikkaa klonaalisen TCR-delta-geenin uudelleenjärjestymän osoittamiseen. Genomisesta DNA:sta monistetaan 6 PCR-alukeparilla jaksoja TCRD-geenistä. Käytettävistä alukepareista 3 on tarkoitettu täydellisten VDJ-uudelleenjärjestymien toteamiseen ja 3 alukeparia erilaisiin epätäydellisiin uudelleenjärjestymiin. Monoklonaalisen PCR-tuotteen erottamiseksi polyklonaalisesta tai oligoklonaalisesta taustasta, monistetulle PCR-tuotteelle tehdään heteroduplex-käsittely ja tuote erotellaan polyakryyliamidigeelillä. Klonaalisuus varmistetaan tarvittaessa DNA-sekvensoinnilla. Sekvensoituun klonaaliseen TCRD-uudelleenjärjestymään voidaan tarvittaessa suunnitella spesifinen ASO-PCR- aluke, jota käytetään TaqMan-PCR-pohjaisessa kvantitatiivisessa jäännöstautianalyytikassa, katso tutkimus 12483 Bm-TCRD-QD.
Lymfoproliferatiivisten tautien diagnostiikka.
Näyte voidaan ottaa vain maanantaista torstaihin klo 14 mennessä, ei arkipyhää edeltävänä päivänä. Tutkimukseen suositellaan luuydinnäytettä, mutta on tehtävissä myös verestä, ks. 6187 B -TCRD-D.
PCR + PAGE. Tarvittaessa DNA-sekvensointi.
Kolmen viikon kuluessa.
4 ml CPT-putki. Suositeltava putkityyppi: BD Vacutainer CPT with Sodium Citrate, 4 mL draw capacity.
Sitraattiruiskulla n. 3 ml luuydinaspiraattia CPT-putkeen. Heti näytteenoton jälkeen sekä ennen sentrifugointia putkea tulee käännellä 8-10 kertaa ylösalaisin. Sentrifugointi (30 min, 1600 g, huoneenlämpö 18-25 °C) kahden tunnin sisällä näytteenotosta. Sentrifugoinnin jälkeen käännetään avaamaton putki 5-10 kertaa ylösalaisin.
4 ml (3 ml) luuydintä.
Ma-to huoneenlämmössä postin pikapakettina.
Lausunto.
Ammattilaisneuvonta Pohjanmaa 041 7314 786.
*15.10.2018 Uusi tutkimus