Vaasa, laboratorio-ohjekirjaUudelleenohjaus https://tutkimusohjekirja.fimlab.fi/ohjekirja/nayta.tmpl?sivu_id=322&setid=6695"Fimlab-ohjekirjaan
Vaasa, laboratorio-ohjekirjaSe även / Ks. myös: Ohjekirjan etusivu | Aakkosellinen luettelo | Aiheenmukainen lista | Päivitykset |Tiedotteet
15.5.2024
Fimlab Vaasa/Kliinisen mikrobiologian laboratorio/(06) 2132842
Bakteremian, fungemian, sepsiksen tai meningiitin epäily.
Veriviljelyautomaatti antaa signaalin mikrobikasvukriteerien täyttyessä. Kasvunopeus riippuu mikrobilajista, mikrobimäärästä veressä, verinäytteen määrästä, veriviljelypullojen veriviljelyautomaattiin laittamisviiveestä ja potilaan mahdollisesta antibioottilääkityksestä.
Tavalliset aerobiset sepsispatogeenit antavat kasvusignaalin 10 – 20 tunnin kuluttua veriautomaattiin laittamisesta. Anaerobeilla, hiivoilla ja muilla hitailla tai vaativilla lajeilla voi kestää pidempään.
Potilaan ensimmäinen positiivinen löydös ilmoitetaan puhelimitse mikrobiologian aukioloaikoina.
Käytännössä, jos laboratorio ei ole ilmoittanut positiivisesta tuloksesta, on viljelyä pidettävä negatiivisena. Negatiiviseksi jääneen pullon tulos vastataan 5 vrk kuluttua. Laboratorioon soittamista emme suosittele, koska se ei tuota lisätietoa. Osaston pyynnöstä lisäkasvatuksessa olevien pullojen lopullinen negatiivinen tutkimustulos annetaan 10 vrk:n kuluttua. Yhden veriviljelyn (yhden tai kahden pullon) kasvun merkitsevyys on riippuvainen eristetystä bakteerista ja potilaan taudinkuvasta. Jos kahdessa veriviljelyssä kasvaa sama(t) mikrobi(t), on tämä melko varma merkki bakteremiasta. Jos kolmessa veriviljelyssä kasvaa sama(t) mikrobi(t), on sitä pidettävä varmana merkkinä bakteremiasta.
Ihokontaminantit (koagulaasinegatiiviset stafylokokit kuten Staphylococcus epidermidis, propionibakteeri, aerobit korynebakteerit, Bacillus sp.) aiheuttavat tulkintavaikeuksia.
Potilaan näytteenotossa tapahtunut poikkeavuus saattaa vaikuttaa viljelytulokseen. Esimerkiksi väärin ajoitettu, liian niukka tai mikrobilääkityksen aikana otettu näyte saattavat aiheuttaa vääriä negatiivisia viljelytuloksia.
Siksi tietyt tapaukset tulee kirjata, jotta niiden perusteella voidaan tarvittaessa kommentoida viljelytulosta.
Näytteenottaja/laboratoriohoitaja:
Merkitse poikkeavuudesta kertova koodi seuraavasti:
| VVA: | Näytettä on saatu < 50 % tavoitteesta (< 5 ml/pullo) |
| VVB: | Näyte on otettu suonikanyylista |
| VVC: | Näytteenotossa on ollut vaikeuksia |
| VVD: | Osaston pyynnöstä lisäkasvatus |
| VVE: | Näytteenotossa on ollut vaikeuksia. Näytettä saatu 50 % (tai alle) tavoitteesta. |
VVE-koodia käytetään kun aikuispotilaalta on saatu näytettä vain yhteen pulloon (eli puolet tavoitteesta) sekä yhdistämään koodit VVA & VVB ja VVA & VVC.
Poikkeamakoodi tai seliteteksti merkitään huopakynällä pullon kylkeen. TUTKIMUS VALMIS:Veriviljelyautomaatti antaa signaalin mikrobikasvukriteerien täyttyessä. Kasvunopeus riippuu mikrobilajista, mikrobimäärästä veressä, verinäytteen määrästä, veriviljelypullojen veriviljelyautomaattiin laittamisviiveestä ja potilaan mahdollisesta antibioottilääkityksestä.
Tavalliset aerobiset sepsispatogeenit antavat kasvusignaalin 10 – 20 tunnin kuluttua veriautomaattiin laittamisesta. Anaerobeilla, hiivoilla ja muilla hitailla tai vaativilla lajeilla voi kestää pidempään.
Potilaan ensimmäinen positiivinen löydös ilmoitetaan puhelimitse mikrobiologian aukioloaikoina.
Käytännössä, jos laboratorio ei ole ilmoittanut positiivisesta tuloksesta, on viljelyä pidettävä negatiivisena. Negatiiviseksi jääneen pullon tulos vastataan 5 vrk kuluttua. Laboratorioon soittamista emme suosittele, koska se ei tuota lisätietoa. Osaston pyynnöstä lisäkasvatuksessa olevien pullojen lopullinen negatiivinen tutkimustulos annetaan 10 vrk:n kuluttua.
Pulloja säilytetään huoneenlämmössä ja suojassa suoralta auringonvalolta. Pidempiaikainen säilytys pimeässä.
| Pullo | Näytemäärä | Huom. |
| BD BACTEC Plus Aerobic/F (sinikorkkinen, harmaa suojus) | 8-10 ml | Aerobipullo |
| BD BACTEC Lytic/10 Anaerobic/F (punakorkkinen, lila suojus) | 8-10 ml | Anaerobipullo |
| BD BACTEC Peds Plus/F (harmaakorkkinen, pinkki suojus) | 0,5-5 ml | Pediatrinen pullo |
Hylkää pullo, jos viimeinen käyttöpäivä on alle 5 vrk näytteenottohetkestä tai korkki/korkinsuoja on rikkoontunut.
Veriviljely otetaan aina ennen muita verinäytteitä ja se on pyrittävä ottamaan myös ennen mikrobilääkkeen aloitusta. Mikrobilääkitys ei kuitenkaan estä näytteenottoa. Tavallisissa tapauksissa aikuisilla kaksi veriviljelyä (=4 veriviljelypulloa) ennen mikrobilääkkeen aloitusta on riittävä määrä toteamaan bakteremian. Sellaisetkin pullot, joihin näytettä ei ole saatu näytteenottoteknisten ongelmien takia tavoitemäärää, tulee toimittaa tutkittavaksi.
Kasvatusaikaa voidaan lisätä 10 vuorokauteen osaston pyynnöstä. Lisäkasvatusta voidaan pyytää esimerkiksi epäiltäessä endokardiittia, hematologista maligniteettia, pahanlaatuista perustautia, sieni-infektiota, tularemiaa, Capnocytophaga-infektiota tai immuunipuutteisen potilaan kohdalla, kun veriviljelyistä ei normaalin kasvatusajan (5 vrk) sisällä ilmene kasvua. On huomioitava, että yllämainituissakin tilanteissa veriviljelyt tulevat tyypillisesti bakteremian yhteydessä positiivisiksi muutamassa vrk:ssa. Mikäli tällainen näyte tulee myöhemmin positiiviseksi, annetaan täydentävä vastaus.
Tutkimuksen kannalta otettava verimäärä on tärkeä. Tämän vuoksi kaksi veriviljelyä eli kaksi pulloparia (aerobi- ja anaerobipullo x 2, aikuisilla 20+20 ml verta) otetaan kun potilaalla on ns. tavallinen septinen infektio eikä epäillä esim. endokardiittia tai vierasesineinfektiota. Lapsipotilaille riittää yksi pediatrinen pullo (1-3 ml verta). Veriviljelyt otetaan yhdellä pistolla (kaksi pulloparia eli 4 pulloa) huolellisen ihon desinfioinnin jälkeen.
Epäselvissä ja toistuvissa kuumeiluissa sekä endokardiitti- ja hiivasepsisepäilyissä suositellaan 3-4 veriviljelyn (yhteensä 6-9 pulloa) ottamista eri aikoina, mieluiten kuumeen nousuvaiheissa.
Kaiken työskentelyn täytyy olla ehdottoman aseptista, koska näytepulloon joutuneet ihobakteerit voivat aiheuttaa väärän positiivisen viljelytuloksen.
Ennen näytteenottoa desinfioi kätesi huolellisesti ja pue puhtaat suojahanskat. Työskentele aseptisesti koko näytteenoton ajan ja tarvittaessa riisu hanskat, desinfioi kädet ja pue puhtaat hanskat.
Tarkista pullojen käyttökelpoisuus (exp. date yli 5 päivää, korkki ehjä).
Merkitse pulloihin näytemäärän merkkiviiva ellei ole ole valmistajan viivaa (katso eri pullojen näytemäärät taulukoista).
Etsi sopivin suoni
Kyynärtaipeen laskimo = tavallinen veriviljely
Mahd. ongelmat näytteenotossa merkitään koodilla pulloon (ks. Virhelähteet).
Ihonpuhdistus
Kostuta taitokset kunnolla A12T:llä. Jos iho on likainen, pyyhi ensin näkyvä lika/veri yms. pois useammalla desinfiointiainetaitoksella ja jatka sitten ihon desinfiointia vielä väh. kolmella erillisellä taitoksella.
Puhdistaminen suoritetaan ylhäältä alaspäin suuntautuvin vedoin, yhdellä taitoksella pyyhkäistään kerran ja sitten vaihdetaan taitos (väh. 3 kpl). Jätä lopuksi yksi taitos pistoalueelle (noin 2 minuutiksi).
Huom. Työskentelyn tulee olla aseptista. Älä koske pistokohtaan puhdistuksen jälkeen!
Poista veriviljelypullojen päällä olevat suojakapselit ja puhdista pullojen korkit A12T:llä kostutetuilla steriileillä taitoksilla ja jätä taitos korkin suojaksi.
Näytettä otettaessa on huolehdittava, ettei pullon sisältöä siirry siipineulan letkua pitkin potilaaseen. Tämä varmistetaan pitämällä pullo pystyasennossa ja pistokohdan tason alapuolella eikä neula saa missään vaiheessa koskettaa pullossa olevan nesteen pintaa, kun neulalla läpäistään veriviljelypullon kumikorkki. Lisäksi on seurattava koko näytteenoton ajan, että verinäyte virtaa pulloon eikä pullossa oleva neste potilaaseen.
Voit irrottaa pullon välillä neulanpidikkeestä tarkistaaksesi oikean näytemäärän.
Ota näyte joko siipineulalla (ensisijainen tapa) tai tarvittaessa ruiskulla ja neulalla, ks. tarkemmat näytteenotto-ohjeet alla.
Poista taitokset ja anna ihon ja pullojen korkkien kunnolla kuivua.
Käytä siipineulaa, jossa on neulanpidike valmiina kiinnitettynä tai kiinnitä aseptisesti neulanpidike siipineulaan.
Avaa siipineulapakkaus aseptisesti.
Paina neulan siivekkeet yhteen, poista suojus ja vie neula suoneen (letkussa näkyy hieman verta).
Paina ensin aerobiviljelypullo (tai PED-pullo) neulan latex-venttiiliin (ota kunnolla kiinni liitoskohdasta).
Letkussa oleva ilma ja näyte virtaavat pulloon.
Katso, että pullo täyttyy sovittuun määrään saakka pullon ollessa pystyasennossa.
Ylitäyttämistä tulee varoa!
Ota pullo irti ja sekoita kallistelemalla pulloa pari kertaa.
Ota näyte sitten anaerobiviljelypulloon kuten edellä.
Ota samalla pistolla myös seuraava pullopari (aerobi- ja anaerobipullo).
Puhdista näytteenoton jälkeen pullojen korkit A12T:llä kostutetuilla steriileillä taitoksilla.
Kiinnitä tutkimuspyyntötarrat pulloihin nille tarkoitetuille alueille tai pystyasentoon siten, että potilastarran viivakoodi ei ole pullon etiketin viivakoodin päällä ja tarran viivakoodi on samansuuntaisesti pullon viivakoodin kanssa.
Ime ruiskuun kerralla tarvittava verimäärä, aikuisilla pullopariin 20 ml, lapsilla käytetään 5 ml ruiskua (1-3 ml verta).
Vaihda aseptisesti steriili neula ruiskuun ja koputtele ilmakuplat pois.
Laske 10 ml ensin anaerobipulloon, sekoita kallistelemalla pulloa.
Laske edelleen 10 ml aerobipulloon, sekoita kallistelemalla pulloa.
Saata mäntää tiukalla otteella sillä pulloissa on voimakas alipaine!
Mikäli saatu verimäärä on 1-3 ml, ruiskuta veri vain pediatriseen pulloon.
Mikäli saatu verimäärä on alle 16 ml, ruiskuta ensin minimäärä anaerobiseen pulloon ja loput joko aerobiseen pulloon tai pediatriseen pulloon (verimäärästä riippuen).
Puhdista näytteenoton jälkeen pullojen korkit A12T:llä kostutetuilla taitoksilla.
Kiinnitä tutkimuspyyntötarrat pulloihin nille tarkoitetuille alueille tai pystyasentoon siten, että potilastarran viivakoodi ei ole pullon etiketin viivakoodin päällä ja tarran viivakoodi on samansuuntaisesti pullon viivakoodin kanssa.
HUOM! Kaikkien muiden neulojen, kuten tavallisten turvaneulojen, käyttö on ehdottomasti kielletty takaisinvirtausriskin vuoksi!
Aerobi- ja anaerobipullo tai pediatrinen pullo, vakuuminäytteenottoon tarkoitettu siipineula pitkällä letkulla ja neulanpidikkeellä (tai kertakäyttöruisku ja neula), kertakäyttöiset suojahanskat, desinfektioaine A12T. Näytteet otetaan huoneenlämpöisiin pulloihin.
Sekä BACTEC että BacT/Alert -veriviljelypulloja säilytetään ja kuljetetaan huoneenlämpöisinä. Ne eivät saa jäähtyä eikä niitä missään tilanteessa laiteta lämpökaappiin.
Osastokierroille tilatut pyynnöt otetaan näytteenottokierroilla. Osastojen itse ottamat näytteet tulee toimittaa laboratorioon välittömästi.
Kaikkina aikoina: tuo pullot B3 tarvikejakelun pöydälle tai putkipostilla B3:een (huom. suojaa pullot käärimällä ne selloloosavanuun ennen laatikkoon ja kapseliin laittamista).
Arkisin mikrobiologian laboratorion aukioloaikana: voit tuoda pullot myös suoraan mikrobiologian laboratorioon (B2) tai putkipostilla B2:een (suojattuina).
VKS päivystyksessä otetut veriviljelypullot laitetaan suoraan päivystyksessä olevaan veriviljelyautomaattiin.
Laboratorion aukioloaikana laboratoriohenkilökunta ottaa näytteet.
Muina aikoina päivystyksen henkilökunta ottaa tarvittaessa näytteet, ja pullot toimitetaan eritelaboratorioon ja jätetään huoneenlämmössä olevaan styroksilaatikkoon. METETELMÄ:Pullot inkuboidaan ja seulotaan veriviljelyautomaatilla. Veriviljelyautomaatin positiivisiksi ilmoittamista pulloista tehdään gramvärjäys sekä tarvittaessa akridiinioranssivärjäys, bakteeri(t) tunnistetaan jatkoviljelyssä ja niille määritetään mikrobilääkeherkkyys.
Pietarsaari: Veriviljelypullot lähetetään Vaasaan huoneenlämpöisinä.
*7.1.2016 siirtyminen Bactec-laitteistoon
*23.1.2023 Lopullinen negatiivinen tutkimustulos 5-6 vrk kuluttua
*5.5.2023 Ohje siirretty Fimlabin ohjekirjaan
*15.5.2024 Uudelleenohjaus Fimlabin ohjekirjaan