Vaasa, laboratorio-ohjekirjaVaasa, laboratorio-ohjekirjaSe även / Ks. myös: Ohjekirjan etusivu | Aakkosellinen luettelo | Aiheenmukainen lista | Päivitykset |Tiedotteet
15.10.2018
TYKS Laboratoriotoimialue / Molekyylihematologia.
Immunoglobuliinigeenin uudelleenjärjestyminen on B-solun kypsymiseen liittyvä prosessi, joka muodostaa pohjan vasta- aineiden monimuotoisuudelle. IgH-geenin uudelleenjärjestyminen on hierarkinen tapahtuma, jossa ensin yhtyvät D- ja J- geenit, jonka jälkeen V-geeni liittyy DJ-kompleksiin. VDJ-rekombinaatiota seuraa konstantin geenialueen liittyminen syntyneeseen uudelleenjärjestymään transkription ja pujonnan tasolla tapahtuvien mekanismien kautta. Monimuotoisuutta luovat niin lukuisten käytössä olevien V- D- ja J-geenien repertuaari, kuin myös entsymaattiset reaktiot, jotka pilkkovat pois normaalia ituratasekvenssiä geenien junktiokohdissa ja syntetoivat uniikkeja nukleotideja liitoskohtiin. Myös V-geeniin syntyvät somaattiset hypermutaatiot lisäävät immunoglobuliinimolekyylien monimuotoisuutta.
Koska kukin B-solu uudelleenjärjestää IgH-geeninsä uniikkiin tapaan, voidaan terveen henkilön näytteessä tavallisesti havaita vain polyklonaalinen uudelleenjärjestymien kirjo. Klonaalisessa B-lymfoproliferatiivisessa taudissa pahanlaatuinen klooni voi käsittää valtaosan lymfaattisista soluista, ja tällöin myös klonaalisen solun sisältämä IgH-uudelleenjärjestymä voidaan havaita molekyyligeneettisin keinoin. IgH-geenin uudelleenjärjestyminen ei ole täysin spesifinen B-lymfoproliferatiivisille taudeille, koska sitä tavataan toisinaan myös T-lymfoproliferatiivisissa taudissa (ristilinjaisuus). Tunnetaan myös tiloja, joissa klonaalisuuteen ei välttämättä liity pahanlaatuista kasvua (esim. MGUS ja MBL), mutta jotka voivat altistaa pahanlaatuiseen kasvuun.
Tässä tutkimuksessa käytetään kvalitatiivista PCR-teknikkaa klonaalisen solupopulaation osoittamiseen. Tutkimuksessa käytetään hyväksi ensisijaisesti BIOMED-2-protokollan mukaista multiplex-PCR-analyysiä. Genomisesta DNA:sta monistetaan viidellä PCR-alukeseoksella jaksoja IgH-geenistä klonaalisen uudelleenjärjestymän osoittamiseksi. Käytettävistä alukeseoksista kolme on tarkoitettu täydellisen VDJ-uudelleenjärjestymän toteamiseen ja kaksi epätäydellisen DJ-uudelleenjärjestymän havaitsemiseen. Monoklonaalisen PCR-tuotteen erottamiseksi polyklonaalisesta tai oligoklonaalisesta taustasta, monistetulle PCR-tuotteelle tehdään heteroduplex-käsittely ja tuote erotetellaan polyakryyliamidigeelillä. Klonaalisuus varmistetaan tarvittaessa DNA-sekvensoinnilla. Sekvensoituun klonaaliseen IgH-uudelleenjärjestymään voidaan tarvittaessa suunnitella spesifinen ASO-PCR-aluke, jota käytetään TaqMan-PCR-pohjaisessa kvantitatiivisessa jäännöstautianalyytikassa (katso tutkimus 12475 Bm-IgH-QD)
Lymfoproliferatiivisten tautien diagnostiikka.
Näyte voidaan ottaa vain maanantaista torstaihin klo 14 mennessä, ei arkipyhää edeltävänä päivänä. Tutkimukseen suositellaan luuydinnäytettä, mutta on tehtävissä myös verestä, ks. 6175 B -IgH-D.
PCR + PAGE. Tarvittaessa DNA-sekvensointi.
Kolmen viikon kuluessa.
4 ml CPT-putki. Suositeltava putkityyppi: BD Vacutainer CPT with Sodium Citrate, 4 mL draw capacity.
Sitraattiruiskulla n. 3 ml luuydinaspiraattia CPT-putkeen. Heti näytteenoton jälkeen sekä ennen sentrifugointia putkea tulee käännellä 8-10 kertaa ylösalaisin. Sentrifugointi (30 min, 1600 g, huoneenlämpö 18-25 °C) kahden tunnin sisällä näytteenotosta. Sentrifugoinnin jälkeen käännetään avaamaton putki 5-10 kertaa ylösalaisin.
Luuydinbiopsia steriiliin keittosuolaa sisältävään pieneen putkeen.
4 ml (3 ml) luuydintä.
Ma-to huoneenlämmössä postin pikapakettina.
Lausunto.
Ammattilaisneuvonta Pohjanmaa 041 7314 786.
*15.10.2018 Uusi tutkimus