Vaasa, laboratorio-ohjekirja

Tarkistettu

4.11.2024

Analysoiva laboratorio

FIMLAB/genetiikan laboratorio/(03) 3117 5424.

Yleistä

B-solujen kypsymisen aikana tapahtuvat immunoglobuliinigeenien uudelleenjärjestymät ja V-geenisegmentin alueella tapahtuvat somaattiset hypermutaatiot ovat pohjana vasta-aineiden monimuotoisuudelle. Kroonisessa lymfaattisessa leukemiassa (KLL) somaattisten hypermutaatioiden määrän on osoitettu korreloivan käänteisesti taudin ennusteeseen.

Tässä tutkimuksessa käytetään lähtömateriaalina luuydinnäytteen tai verinäytteen mononukleaarisista soluista eristettyä RNA:ta ja siitä valmistettua cDNA:ta. Näytteestä monistetaan PCR-reaktiossa kuudella IgH-geenin luokkaspesifisellä alukeparilla pahanlaatuiseen klooniin liittyvä V-D-J -uudelleenjärjestymä ja saatu PCR-tuote sekvensoidaan geenisegmenttien analysoimiseksi. V-geenin sekvenssiä verrataan ns. alkuperäiseen, ei-mutatoituneeseen ituratasekvenssiin, ja tämän perusteella lasketaan V-jakson samankaltaisuusaste FRI-alueen alusta FRIII-alueen loppuun.

Tulos ilmoitetaan prosentteina. Mikäli samankaltaisuusaste on suurempi tai yhtäsuuri kuin 98 %, potilaan tauti luokittuu ns. huonoennusteiseen ei-mutatoituneeseen KLL:aan. Lisäksi raportoidaan mahdollinen ennusteellisesti merkityksellinen uudelleenjärjestymän stereotyyppiluokka. Tutkimuksen myötä saadaan myös IgH-uudelleenjärjestymän VDJ-junktioalueen sekvenssi. Tätä voidaan tarvittaessa käyttää hyväksi, mikäli hoitovastetta halutaan myöhemmin seurata ASO-PCR -tutkimuksella. ESIVALMIKSTELUT:Tutkimukseen suositellaan luuydinnäytettä. Verinäyte tulee kyseeseen silloin, jos luuytimestä ei saada edustavaa näytettä.

Indikaatiot

Ennusteellinen tutkimus kroonisessa lymfaattisessa leukemiassa. Tutkimuksella selvitetään pahanlaatuisessa kloonissa esiintyvän IgH-uudelleenjärjestymän käyttämä V-geenisegmentti ja siinä esiintyvät somaattiset hypermutaatiot. Ig-mutaatiostatuksen perusteella potilaan tauti voidaan luokittaa todennäköiseen riskiluokkaan esimerkiksi intensiivihoitotarpeen arvioimiseksi.

Tulos valmiina

Kuukauden kuluessa.

Näyteastia

BD Vacutainer CPT with Sodium Citrate, 4 mL draw capacity).

Näytteenotto

Käännetään putki 8 kertaa ylösalaisin näytteenoton jälkeen. Sentrifugointi (30 min, 1600xg, huoneenlämpö 18-25°C) kahden tunnin sisällä näytteenotosta. Sentrifugoinnin jälkeen käännetään avaamaton putki 8-10 kertaa ylösalaisin.

Näyte (minimi)

Luuydin: Sitraattiruiskulla n. 3 ml luuydintä CPT-putkeen.

Näytteen säilytys

Huoneenlämmössä.

Näytteen lähetys

Huoneenlämmössä.

Lisätietoja

Ammattilaisneuvonta Pohjanmaa 041 7314 786

Muutokset

*4.11.2024 Uusi tutkimus.